葉綠體中色素的提取和分離

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　葉綠體中的色素能夠溶解在有機(jī)溶劑丙酮中，所以，可以通過研磨法用丙酮提取葉綠體中的色素(若無丙酮亦可用酒精代替)。

　　層析液（在60℃～90℃下分餾出來20份石油醚 + 2份丙酮 + 1份苯）是一種脂溶性很強(qiáng)的有機(jī)溶劑。葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同(溶解度高的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得快；溶解度低的隨層析液在濾紙上擴(kuò)散得慢。)，所以，可以用紙層析法分離出葉綠體中的色素。

　　二、目的要求

　　1.初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

　　2.探索葉綠體中有幾種色素。

　　胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同，可以分出四條色素帶。

　　三、重點(diǎn)與難點(diǎn)

　　重點(diǎn):

　　1.初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。

　　2.探索葉綠體中有幾種色素。

　　難點(diǎn):

　　1.該實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問題。

　　2.培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的能力,掌握探究實(shí)驗(yàn)的方法。

　　四、材料用具

　　新鮮的綠色葉片(如菠菜葉片)。

　　干燥的定性濾紙，燒杯(100mL)，研缽，小玻璃漏斗，尼龍布，毛細(xì)吸管，剪刀，小試管，培養(yǎng)皿蓋，藥勺，量筒(10mL)，天平。

　　丙酮，層析液，二氧化硅，碳酸鈣。

　　五、方法步驟(觀察錄象)

　　1.研磨  2.濾液   3.把濾液印在濾紙上(與教材不同)  4.層析

　　☆用毛細(xì)吸管劃線時(shí)間長易損傷紙纖維,效果欠佳,改用玻璃片印跡,效果好。

　　結(jié)論:葉綠體含有四種色素,胡蘿卜素在最上端,呈橙黃色；其次是葉黃素，呈黃色；中間是藍(lán)綠色的葉綠素a ；下端是黃綠色的葉綠素b。

　　注意:本實(shí)驗(yàn)丙酮加入3mL足夠，研磨液用杵棒推擠，即可擠出較濃的色素提取液，連同糊狀物直接倒入小燒杯，不需過濾，但擠出的研磨液仍可稱為"過濾液"。

　　Ⅱ 隨堂演練

　　1.通過紙層析分離葉綠體色素，結(jié)果在濾紙條上出現(xiàn)四條色素帶，從上到下依次為（    ）

　　 A.胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b

　　 B.胡蘿卜素、葉綠素a、葉綠素b、葉黃素

　　 C.葉綠素b、葉綠素a、葉黃素、胡蘿卜素

　　 D.葉黃素、葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素

　　2.下列關(guān)于"葉綠體色素提取和分離"的實(shí)驗(yàn)描述中，不屬于實(shí)驗(yàn)要求的是 （    ）

　　 A.提取高等植物葉綠體中的色素    B.用紙層析法分離色素

　　 C.了解各種色素的吸收光譜       D.驗(yàn)證葉綠體中所含色素的種類

　　3.用紙層析法將色素進(jìn)行分離,在濾紙條上出現(xiàn)的最窄的一條色素帶的顏色是 （    ）

　　 A.黃色  B.橙黃色     C.黃綠色      D.藍(lán)綠色

　　4.提取葉綠體中的色素時(shí)要加丙酮，其原因是   （    ）

　　 A.讓色素溶解                   B.防止葉綠素被破壞

　　 C.便于將葉片研磨成勻漿         D.促使葉綠體中色素分離

　　5.在葉綠體色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)中，在濾紙條上擴(kuò)散速度最快的色素是 （    ）

　　 A.葉綠素a     B.葉綠素b     C.胡蘿卜素     D.葉黃素

　　6.綠色植物的光合作用中，葉綠素是   （    ）

　　 A.光合作用的原料 B.光合作用的產(chǎn)物 C.能量轉(zhuǎn)換器     D.氫的接受器

　　7.右圖為用分光光度計(jì)測定葉片中兩類色素吸收不同波長光波的曲線圖，請判定A和B分別為何種色素（    ）

　　 A.葉綠素、類胡蘿卜素

　　 B.類胡蘿卜素、葉綠素

　　 C.葉黃素、葉綠素a

　　 D.葉綠素a、葉綠素b

　　8.將幾株相同的天竺葵放在不同的光下生長，其他條件

　　  都相同，一段時(shí)間后，生長狀態(tài)最差的應(yīng)是（    ）

　　 A.藍(lán)紫光下的天竺葵          B.黃綠光下的天竺葵

　　 C.紅橙光下的天竺葵              D.紅光下的天竺葵

　　9.下列作用不屬于葉綠素的功能的是   （    ）

　　 A.吸收光能   B.利用光能使水分解 

　　 C.利用光能合成ATP   D.固定和還原二氧化碳

　　參考答案:1.A  2.C   3.B  4.A  5.C  5.C  6.A  7.B  8.D   9.D

　�、蟆≌n后作業(yè)

　　1.實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(實(shí)驗(yàn)八)

　　2.能力提高練習(xí)

　　(1)在圓形濾紙的中央，點(diǎn)上葉綠體色素的提取液進(jìn)行層析，隨著層析液從濾紙的中央向四周擴(kuò)散，形成四個(gè)色素環(huán)帶，排在最里圈的色素是（    ）

　　A.橙黃色

　　B.黃綠色

　　C.藍(lán)綠色

　　D.黃色

　　(2)生物學(xué)家恩格曼將可見光通過三棱鏡后照射在絲狀綠藻上，

　　發(fā)現(xiàn)原來絲狀綠藻周圍均勻分布的好氧性細(xì)菌發(fā)生重新分布，

　　不同區(qū)域聚集著不同數(shù)量的細(xì)菌(如圖)，請分析回答:

　　①細(xì)菌重新分布時(shí)，主要聚集在           光投射區(qū)的綠藻周圍。

　　②發(fā)生這種現(xiàn)象的原因是，綠藻細(xì)胞中的葉綠素主要吸收           光，進(jìn)行    作用，放出的           多，以滿足好氧型細(xì)菌的需要。

　　(3)在做"葉綠體中色素的提取和分離"實(shí)驗(yàn)時(shí)，向研缽中加入SiO2的目的是     ，加入  CaC03的目的是           ；在盛有層析液的燒杯上蓋上培養(yǎng)皿蓋的目的是      ，在濾紙條上擴(kuò)散速度最慢的色素帶是             ，其顏色是               。

　　(4)某同學(xué)在做"葉綠體中色素的提取分離"實(shí)驗(yàn)時(shí)，操作情況如下所述，結(jié)果實(shí)驗(yàn)失敗，請指出其錯(cuò)誤所在:

　　①將5克新鮮完整的菠菜葉，放在研缽中，加入丙酮、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨。

　　②用毛細(xì)吸管吸取少量濾液，沿鉛筆線處小心均勻地劃出一條濾液細(xì)線，并連續(xù)迅速地重復(fù)劃2～3次。

　　③把劃好細(xì)線的濾紙條插入層析液中，并不斷搖晃，以求加快色素在濾紙條上的擴(kuò)散。

　　參考答案:1.(略) 2.(1)B  (2)(1)紅光和藍(lán)紫      (2)紅光和藍(lán)紫   光合  氧氣  (3)了使研磨充分  防止在研磨過程中，葉綠素受到破壞  防止層析液揮發(fā)葉綠素b黃綠色   (4)①未去除粗葉脈和將葉剪碎，這樣降低了葉綠素的提取率  ②上一次濾夜細(xì)線未干燥，即進(jìn)行下一次劃線，使濾液線過粗或紙上色素量較低  ③由于搖晃，層析液接觸液線，溶解了色素。